Posted by on 4 grudnia 2018

Każda partia była skuteczna do transdukcji CFTR w teście Western blot i do wydzielania chlorków in vitro, a wektor oznaczono miana i wykazano, że jest skuteczny (za pomocą testu Western blot) po rozcieńczeniu 2 ml 3% glicerolu w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem ( pojazd). Projekt badania
Dawkowanie
Wektor adenowirusowy podawano trzem kohortom po trzy pacjentki, w logarytmicznie rosnących dawkach. Dawka wektora biologicznego jest złożona i można ją opisać pod względem stężenia (w jednostkach tworzących łysinki na mililitr), całkowitej dawki (w jednostkach tworzących łysinki) i szacowanej liczby wektorów podawanych na komórkę nabłonka ( szacowana wielość infekcji) (Tabela 1). Dwa mililitry wektora nośnika lub adenowirusa podano w infuzji (przez 30 minut) pod bezpośrednim widzeniem na niższe i przyśrodkowe powierzchnie małżowin nosowych dolnych i dna nosa (około 8 cm2 lub 2 × 107 komórek nabłonka powierzchniowego23) prawego nozdrza, z podmiot w prawej pozycji leżącej poprzecznie. Po leczeniu osobnik pozostawał w tej pozycji przez dodatkowe 20 minut. Osobnik został następnie ponownie ustawiony w pozycji leżącej poprzecznie w pozycji leżącej, a lewe nozdrze zostało potraktowane alternatywnym rozwiązaniem. Badania symulujące dawkę wskazały, że 58 . 4 procent zaaplikowanego roztworu pozostawało w nosie przez 50 minut. Tożsamość zaszczepionych rozwiązań była znana tylko jednemu badaczowi.
Wykrywanie wektora
Monitorowaliśmy resztkowy wektor adenowirusowy w próbkach moczu i próbki otrzymane za pomocą wymazu z nosa, gardła i odbytu przez hodowlę wirusową 293 komórek21 i przez zagnieżdżoną reakcję łańcuchową polimerazy (PCR) za pomocą starterów, które amplifikują region L3 adenowirusa i sekwencje CFTR specyficzne dla wektora.
Bezpieczeństwo
Monitorowaliśmy objawy, parametry życiowe i morfologię krwi i codziennie sprawdzaliśmy nos. Na początku i na końcu badania wykonano radiografię klatki piersiowej, badanie chemii krwi i spirometrię. Miana przeciwciał przeciw adenowirusowi w surowicy mierzono przed i 21 dni po leczeniu.22 Codziennie analizowano płyn do płukania nosa pod kątem całkowitej liczby komórek (na podstawie hemocytometrii), różnic w liczbie komórek (w preparatach cytospinowych) i obecności cytokin (interleukina-1., interleukina-6, interleukina-8 i interleukina-10) i albumina.24,25 Sześć dni po traktowaniu pobrano wycinki z małżowin dolnych, natychmiast zamrożono (w ciekłym azocie) i zanalizowano pod kątem nacieków komórek zapalnych.
Skuteczność transferu genów
Przeprowadzono test PCR z odwrotną transkryptazą RNA potraktowanego DNazą z próbek zdrapkowych nabłonka nosa otrzymanych 6 i 21 dni po dawkowaniu27; swoisty dla wektora RNA informacyjny RNA (mRNA) został zamplifikowany ze starterami poprzez skrzyżowanie 3. CFTR i nieulegających translacji sekwencjami wirusowymi. Przeprowadzono hybrydyzację in situ z rybosonami specyficznymi dla ekspresjonowanych sekwencji wektorowych.28
Funkcjonalną skuteczność leczenia wektorowego badano mierząc różnicę potencjału (PD) lub napięcie w nabłonku nosa na 3 oddzielne dni przed leczeniem, następnie codziennie przez maksymalnie 14 dni i 21 dnia po leczeniu.16,17 , 29 Protokół mierzył podstawowe PD (wskaźnik transportu sodu i integralność śluzówki) i wskaźniki transportu sodu (podstawowa PD i stopień hamowania przez bloker kanału sodowego, amiloryd [10-4 M]); podstawowa przepuszczalność chlorków (odpowiedź na perfuzję za pomocą roztworu wolnego od chlorków zawierającego amiloryd); wydzielanie chlorku (CFTR) regulowane cAMP (odpowiedź na izoproterenol [10-5 M] w perfuzacie w obecności roztworu wolnego od chlorków); oraz zdolność nabłonka do wydzielania chlorków (wpływ ATP [10-4 M] w perfuzacie bez chlorków na wapniowe wydzielanie chlorku29)
[przypisy: zus sanatoria lista oczekujących, kto może zostać dawcą szpiku, nfz szczecin przeglądarka skierowań ]

Powiązane tematy z artykułem: kto może zostać dawcą szpiku nfz szczecin przeglądarka skierowań zus sanatoria lista oczekujących

Posted by on 4 grudnia 2018

Każda partia była skuteczna do transdukcji CFTR w teście Western blot i do wydzielania chlorków in vitro, a wektor oznaczono miana i wykazano, że jest skuteczny (za pomocą testu Western blot) po rozcieńczeniu 2 ml 3% glicerolu w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem ( pojazd). Projekt badania
Dawkowanie
Wektor adenowirusowy podawano trzem kohortom po trzy pacjentki, w logarytmicznie rosnących dawkach. Dawka wektora biologicznego jest złożona i można ją opisać pod względem stężenia (w jednostkach tworzących łysinki na mililitr), całkowitej dawki (w jednostkach tworzących łysinki) i szacowanej liczby wektorów podawanych na komórkę nabłonka ( szacowana wielość infekcji) (Tabela 1). Dwa mililitry wektora nośnika lub adenowirusa podano w infuzji (przez 30 minut) pod bezpośrednim widzeniem na niższe i przyśrodkowe powierzchnie małżowin nosowych dolnych i dna nosa (około 8 cm2 lub 2 × 107 komórek nabłonka powierzchniowego23) prawego nozdrza, z podmiot w prawej pozycji leżącej poprzecznie. Po leczeniu osobnik pozostawał w tej pozycji przez dodatkowe 20 minut. Osobnik został następnie ponownie ustawiony w pozycji leżącej poprzecznie w pozycji leżącej, a lewe nozdrze zostało potraktowane alternatywnym rozwiązaniem. Badania symulujące dawkę wskazały, że 58 . 4 procent zaaplikowanego roztworu pozostawało w nosie przez 50 minut. Tożsamość zaszczepionych rozwiązań była znana tylko jednemu badaczowi.
Wykrywanie wektora
Monitorowaliśmy resztkowy wektor adenowirusowy w próbkach moczu i próbki otrzymane za pomocą wymazu z nosa, gardła i odbytu przez hodowlę wirusową 293 komórek21 i przez zagnieżdżoną reakcję łańcuchową polimerazy (PCR) za pomocą starterów, które amplifikują region L3 adenowirusa i sekwencje CFTR specyficzne dla wektora.
Bezpieczeństwo
Monitorowaliśmy objawy, parametry życiowe i morfologię krwi i codziennie sprawdzaliśmy nos. Na początku i na końcu badania wykonano radiografię klatki piersiowej, badanie chemii krwi i spirometrię. Miana przeciwciał przeciw adenowirusowi w surowicy mierzono przed i 21 dni po leczeniu.22 Codziennie analizowano płyn do płukania nosa pod kątem całkowitej liczby komórek (na podstawie hemocytometrii), różnic w liczbie komórek (w preparatach cytospinowych) i obecności cytokin (interleukina-1., interleukina-6, interleukina-8 i interleukina-10) i albumina.24,25 Sześć dni po traktowaniu pobrano wycinki z małżowin dolnych, natychmiast zamrożono (w ciekłym azocie) i zanalizowano pod kątem nacieków komórek zapalnych.
Skuteczność transferu genów
Przeprowadzono test PCR z odwrotną transkryptazą RNA potraktowanego DNazą z próbek zdrapkowych nabłonka nosa otrzymanych 6 i 21 dni po dawkowaniu27; swoisty dla wektora RNA informacyjny RNA (mRNA) został zamplifikowany ze starterami poprzez skrzyżowanie 3. CFTR i nieulegających translacji sekwencjami wirusowymi. Przeprowadzono hybrydyzację in situ z rybosonami specyficznymi dla ekspresjonowanych sekwencji wektorowych.28
Funkcjonalną skuteczność leczenia wektorowego badano mierząc różnicę potencjału (PD) lub napięcie w nabłonku nosa na 3 oddzielne dni przed leczeniem, następnie codziennie przez maksymalnie 14 dni i 21 dnia po leczeniu.16,17 , 29 Protokół mierzył podstawowe PD (wskaźnik transportu sodu i integralność śluzówki) i wskaźniki transportu sodu (podstawowa PD i stopień hamowania przez bloker kanału sodowego, amiloryd [10-4 M]); podstawowa przepuszczalność chlorków (odpowiedź na perfuzję za pomocą roztworu wolnego od chlorków zawierającego amiloryd); wydzielanie chlorku (CFTR) regulowane cAMP (odpowiedź na izoproterenol [10-5 M] w perfuzacie w obecności roztworu wolnego od chlorków); oraz zdolność nabłonka do wydzielania chlorków (wpływ ATP [10-4 M] w perfuzacie bez chlorków na wapniowe wydzielanie chlorku29)
[przypisy: zus sanatoria lista oczekujących, kto może zostać dawcą szpiku, nfz szczecin przeglądarka skierowań ]

Powiązane tematy z artykułem: kto może zostać dawcą szpiku nfz szczecin przeglądarka skierowań zus sanatoria lista oczekujących